以免疫活性串联片段FB为抗原检测FMDV抗体的间接ELISA方法

将口蹄疫病毒免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD／TOPO中，得到重组质粒pBAD-FB，将此重组质粒转化到受体茵TOPIO中，以不同浓度的阿拉伯醛糖进行诱导，并在不同诱导时间进行采样，经处理后做SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果发现以终浓度为0．02g／L的阿拉伯醛糖进行诱导，4h后表达量可达高峰，其大小约为26ku，扫描结果显示，FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28．9％，能与抗FMDV抗体发生特异性反应，融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用500g／L Ni-NTA树脂过柱纯化后作为包被抗原，成功地建立了检测血清中FMD抗体的间接ELISA方法。融合蛋白的最佳包被浓度是40μg／mL；标准阳性血清的最适稀释倍数为1：160；最佳封闭液为50g／L脱脂奶粉和PBS；最佳封闭时间为1h。用建立的ELISA方法对采集的118份样品进行检测，并与全病毒包被抗原ELISA、间接血凝诊断试剂盒和UBI VP1抗体检测ELISA试验盒的检测结果比较，证明所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性。     

乳牛L-选择素单克隆抗体的制备与亚类鉴定

以乳牛L-选择素为免疫抗原免疫BALB／c小鼠1只，相隔14d进行3次免疫，抗原用量每次30big，首次免疫后第116d进行尾静脉加强免疫，抗原用量10μg。免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后接种12块96孔板。以L-选择素包被酶标板，间接ELISA检测阳性孔，有限稀释法克隆阳性孔，筛选出6株杂交瘤细胞。小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株制备McAb，并对其分别进行Ig亚类测定。结果，6株杂交瘤细胞7810、10F6、10E2、5C6、12G7和llA3的Ig亚类分别是IgG2a、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG1和IgG1。     

利用不同源红细胞检测鹅禽流感抗体效价的报告

从某一已免疫禽流感的种鹅场采取30份血样，分别以健康鸡红细胞悬液和健康皖西白鹅红细胞悬液为指示剂，对30份血样进行禽流感血凝和血凝抑制试验。结果：用鸡红细胞悬液作指示剂进行血凝试验，测出抗原4HAU为1：32；用鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝试验，测出抗原4HAU为1：8以1：32倍数稀释抗原，分别用鸡红细胞和鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝抑制试验，测出30份鹅血清禽流感H5免疫抗体效价的平均值分别为2^5.8和2^3.9；以1：8倍数稀释抗原，用鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝抑制试验，测出30份鹅血清禽流感免疫抗体的平均效价为2^5.1。     

抗禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的病毒中和作用

通过血凝抑制(HI)和鸡胚中和试验(VN)证实，本实验室制备的抗禽流感H9M2单抗11A5和11B2株可特异性地抑制H9亚型禽流感病毒的血凝特性，而与禽流感H5和H7亚型以及其他具有血凝性感染禽类的病毒(如新城疫等)不反应。两株单抗腹水HI效价均达到15Log2。中和试验表明：上述两株单抗均可有效抑制H9N2病毒在SPF鸡胚中的增殖，使病毒失去血凝活性．测得11A5和11B2株腹水对H9N2禽流感病毒的半数保护量分别为10^-3.35和10^-4.58。该单抗的研制成功对于进一步建立快速鉴别诊断禽流感H9亚型病毒具有重要意义。     

天然鼠源噬菌体单链抗体库的构建

噬菌体展示技术是一项利用丝状噬菌体体外表达外源基因的新技术。它模拟动物体内抗体的形成过程，将抗体片段呈现在噬菌体表面，建成噬菌体抗体库，用与亲和层析相类似的原理，从抗体库中筛选出特异性噬菌体抗体，为制备人和动物用抗体提供了极为有效的手段。单链抗体是利用基因工程技术，由一个DNA片段(Linker)将抗体重链、     

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化

利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法.该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性.与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P＞O.17为阳性判定标准.应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%.     

己烯雌酚完全抗原的合成和多克隆抗体的制备

采用混合酸酐法,将己烯雌酚与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联形成完全抗原.经紫外分光光度计扫描鉴定,并通过聚丙烯酰胺电泳实验,推算出牛血清白蛋白与DES-HS的结合比是1:25～1:30.以己烯雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验进行鉴定,并采用酶联免疫吸附方法进行效价测定,抗血清效价均超过了1:10 000.     

抗体信号肽基因的克隆和序列测定及真核表达载体的构建

根据抗体重链与轻链基因的核苷酸序列设计并合成了1对引物,以猪外周血淋巴细胞基因组mRNA为模板,通过RT_PCR方法获得了一大小约85bp的DNA片段,并将其克隆到pGEM_T载体上进行序列测定,测序结果显示,猪抗体信号肽基因核苷酸序列长度为57bp,编码19个氨基酸,核苷酸及推导的氨基酸序列与已发表的抗体信号肽基因序列一致,同时在信号肽基因3’端下游提供可供肽酶切割的窗口和外源基因的克隆位点。然后将信号肽基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )中,成功构建了一含信号肽序列的真核表达载体3.1_SFc,为外源基因在pcDNA3.1( )中的表达与分泌提供了一有效的信号肽,也为研究基因的功能奠定了基础。     

猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究

本试验采用IHA试验方法,对经猪瘟灭活疫苗免疫的猪抗体产生的水平进行了监测,并对仔猪母源抗体的消长规律进行了研究.结果表明仔猪母源抗体水平与母猪抗体水平呈正相关,其首次免疫抗体增长幅度与母源抗体呈负相关,但其抗体水平与免疫次数呈正相关.主要免疫的抗体效价与免疫剂量呈正相关,而与首免日龄无关.攻毒结果表明:当IHA＜6log2时,仅能抗死亡;当IHA≥7log2时,可抗感染.     

检测E.coliO157特异性IgY的间接ELISA方法的建立

本实验以E．coliO157免疫产蛋鸡，经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY，并以10^8～10^9 CFU／ml灭活E．coliO157为包被抗原，建立了抗E．coliO157卵黄抗体的间接ELLSA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1：320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELLSA检测的影响。该方法简便可靠，适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和大批检测。